前面我给大家详细介绍过
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☞GO简介及GO富集结果解读
☞四种GO富集柱形图、气泡图解读
☞GO富集分析四种风格展示结果—柱形图,气泡图
☞KEGG富集分析—柱形图,气泡图,通路图
☞ DAVID GO和KEGG富集分析及结果可视化
也用视频给大家介绍过
☞ GO和KEGG富集分析视频讲解
最近有粉丝反映说,利用clusterProfiler这个包绘制GO富集分析气泡图和柱形图的时候,发现GO条目的名字都重叠在一起了。
气泡图
柱形图
这个图别说美观了,简直不忍直视。经过我的认真研究,发现跟R版本有关。前面我给大家展示的基本都是R 3.6.3做出来的图。很多粉丝可能用的都是最新版本的R 4.1.2。
我们知道R的版本在不停的更新,相应的R包也在不停的更新。我把绘制气泡图和柱形图相关的函数拿出来认真的研究了一下,终于发现的症结所在。
dotplot这个函数,多了个 label_format 参数
我们来看看这个参数究竟是干什么用的,看看参数说明
label_format :
a numeric value sets wrap length, alternatively a custom function to format axis labels. by default wraps names longer that 30 characters
原来这个参数默认值是30,当标签的长度大于30个字符就会被折叠,用多行来展示。既然问题找到了,我们就来调节一下这个参数,把他设置成100,让我们的标签可以一行展示。
是不是还是原来的配方,还是熟悉的味道
同样的柱形图,我们也能让他恢复原来的容貌。
关于如何使用R做GO和KEGG富集分析,可参考下文
GO和KEGG富集分析视频讲解
当富集分析完成,拿到如下的分析结果后,就可以进行作图了。
富集分析结果的可视化无非就是柱状图和气泡图,但是公司默认出图实在是太丑,所以还是自己动手修改修改。
一、常规柱状图(ggplot2)
横轴为gene counts,或者用-logP也行,填充相应的用P值或者gene counts。ggplot画图的好处就是可以进行很多调整。
二、常规气泡图(ggplot2)
气泡图与柱状图如出一辙,只是在展示方式上出现了差别。一个用geom_bar()函数,气泡图类似于散点图用geom_point()函数。
三、上下调同时展示(ggplot2)
很多时候研究者拿到差异基因后,上下调基因是分别富集的,在展示上需要同时体现二者,我们之前提到metascape可以做到: 转录组不求人系列(十二): Cell文章最喜欢用的差异基因GO、KEGG富集分析工具 ,除此之外,之前讲过的气泡图也可以展现多组的结果: 复现《nature communications》图表(四):ggplot画多组富集气泡图 。这里我们继续提供一种bar图的展示方式。将down的数值调整为负,做一列分组,就可以展示了。
当然了,以上所说的可视化还是比较常规,在基础上可以自己做调整。也有一些文章总是标新立意,有很多奇特的展现方式,我们会在之后的系列中讲解。
单细胞富集分析系列:
单细胞富集分析我最常用的是 分组GSVA ,但最近用到了GO分析,就复习一下GO和KEGG富集分析及绘图。
载入无比熟悉的pbmc.3k数据集 (已注释好,数据准备见 monocle )
pbmc3k数据集只有1个样本,没办法区分HC和病例组。
若有分组,可以使用subset函数将某种细胞取出,来做这种细胞病例组和对照组相比的差异基因和富集分析
之所以长短不齐不按顺序是因为没有排序
排完续之后再画p值就是按顺序的了
附: 单细胞测序数据的差异表达分析方法总结
2018年SCI论文--整合GEO数据挖掘完整复现 七 :DAVID在线工具进行KEGG富集分析_bioprogrammer-CSDN博客
“差异基因kegg注释图”是转录组分析结果的重要组成部分,能够帮助大家了解差异基因分属于哪些代谢通路,文章中如果能够插入下面这类图来说明样品间的差异,一定会为你的文章增色不少。
下面给大家介绍一下如何在Windows下对差异基因进行kegg注释。
一、输入数据准备:
首先要准备的是各比较组(比如CK1比上Treat1)的差异基因列表,一般公司做完的标准分析结果里已经包含这部分内容了,通常在“DEG_Analysis”文件夹里,我们用到的信息是“ 基因ID ”和“ regulated ”(up代表上调,down代表下调)两列,如下图所示的第一列和最后一列:
接下来需要添加一列,将“regulated”里的“up”标记成“red”,“down”标记成“green”,这样后面做出来的kegg注释图里上调基因就会显示为红色,下调基因显示为绿色。具体方法是在第三列插入一个“ if ”函数,当第二列值为“up”时输出“red”,否则输出“green”,参数设置详见下图:
这样C2单元格就会显示为“red”,双击该单元格右下角,这样C列就都按上面的规则填充好了,如下图所示:
二、在作图网站填入数据:
打开网站:
按照下方设置好参数,并将第一步准备好的Excel表里的第一和第三列数据粘贴进去(注意:Excel表的 第一行 和 第二列 都不用粘贴),点击左下角的“exec”按钮开始运算。根据您提交的基因数量,等待一小段时间结果就出来了:
注释到的代谢通路结果,按数量排序:
点击其中的代谢通路链接,就能够看出该代谢通路中哪些基因上调、哪些基因下调了。
好的,这样差异基因的kegg注释就完成了。掌握之后,便可在几分钟之内做任意差异基因列表的kegg注释图而不用找公司了!
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8.其他课程链接: 二代测序转录组数据自主分析 、 NCBI数据上传 、 二代测序数据解读 。
之前分享了如何用ggplot2可视化GO分析的结果。既然做了GO,当然少不了KEGG了。
同样的,我们从 DAVID 获取KEGG pathway的结果。
对于KEGG,我比较喜欢做气泡图,这样用两种形式的图结合在一起,效果更丰富更好看一点。